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堿性磷酸酶(ALP)染色實(shí)驗(yàn)代測(cè)服務(wù)

信帆生物提供:堿性磷酸酶(ALP)染色實(shí)驗(yàn)代測(cè)服務(wù)
服務(wù)介紹:ALP染色(堿性磷酸酶染色)是一種用于檢測(cè)細(xì)胞或組織中堿性磷酸酶(ALP)活性的實(shí)驗(yàn)方法。ALP是一種廣泛存在于多種組織(如骨骼、肝臟、腎臟和胎盤)中的酶,其活性常被用作干細(xì)胞多能性、成骨細(xì)胞分化以及某些疾?。ㄈ绺尾『凸遣。┑臉?biāo)志物。

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  • 更新時(shí)間:2025-02-14
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信帆生物提供:堿性磷酸酶(ALP)染色實(shí)驗(yàn)代測(cè)服務(wù)

服務(wù)介紹:ALP染色(堿性磷酸酶染色)是一種用于檢測(cè)細(xì)胞或組織中堿性磷酸酶(ALP)活性的實(shí)驗(yàn)方法。ALP是一種廣泛存在于多種組織(如骨骼、肝臟、腎臟和胎盤)中的酶,其活性常被用作干細(xì)胞多能性、成骨細(xì)胞分化以及某些疾?。ㄈ绺尾『凸遣。┑臉?biāo)志物。
檢測(cè)原理:
堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯(lián)法)不是采用金屬沉淀法來(lái)顯示堿性磷酸酶活性,而是采用偶氮偶聯(lián)法(又稱同時(shí)偶聯(lián)法),其原理是在pH9.29.8的堿性條件下,細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶可使AB-BI磷酸鹽水解,釋放出磷酸不萘酚,后者不偶聯(lián)重氮鹽生成有色產(chǎn)物,定位于細(xì)胞質(zhì)中。該染液可用于血液、骨髓或細(xì)胞涂片、冰凍切片、梯度入水后的石蠟切片等的堿性磷酸酶染色,堿性磷酸酶活性部位呈藍(lán)色,位于胞槳,結(jié)果較金屬鹽沉淀法可靠。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1.
、新鮮組織冰凍切片 6-8um 或者石蠟切片經(jīng)脫蠟至水洗;
2
、放入孵育液中置于 37℃溫箱內(nèi)孵育。冰凍切片 10-30min,石蠟切片 1-2h(陰性對(duì)照片用陰性對(duì)照孵育液);
3
、蒸餾水稍洗;
4
、配制ALP孵育液:按照1:1的比例混合B1:AS-BI染色液和B2:FBB染色液
5
、切片如ALP固定液固定3min,水洗;
6
、滴加配制好的ALP孵育液,放入濕盒中,避光孵育15~20min,水洗;
7
、入核固紅染色液或甲基綠染色液復(fù)染3~5min,水洗;
8
、冰凍切片用甘油明膠固定;石蠟切片常規(guī)脫水、透明及封固。
注意事項(xiàng):
1
、樣本處理:確保樣本新鮮,并及時(shí)進(jìn)行固定處理,避免影響酶的活性。
2
、染色液配制:ALP染色液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用,避免長(zhǎng)時(shí)間放置導(dǎo)致失效或降低陽(yáng)性強(qiáng)度。
3
、實(shí)驗(yàn)條件控制:嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件,如溫度、時(shí)間和pH值等,以確保染色效果的準(zhǔn)確性和可靠性。
4
、陽(yáng)性對(duì)照:每次染色時(shí),應(yīng)設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,以便對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行準(zhǔn)確判斷。



僅供科研實(shí)驗(yàn)用,不做其他用途!

 

 

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