研究采用高致病性禽流感病毒（Highly pathogenic avian influenza virus，HPAIV）A／FPV／Rostock／34（H7N1）（FPV）毒株作為免疫原，免疫8周齡BALB／C雌性小鼠，三次加強(qiáng)免疫后取脾細(xì)胞與SP2／0細(xì)胞融合，用血凝抑制試驗(yàn)（HI）方法檢測(cè)篩選，陽(yáng)性細(xì)胞克隆經(jīng)有限稀釋法克隆培養(yǎng)，zui后獲得兩株H7亞型HA特異性單抗6H4和7F6，亞類(lèi)分別為IgG2a、IgG2b，輕鏈都為k鏈，經(jīng)檢測(cè)具有良好的特異性。采用純化的HPAIV A／FPV／Rostock／34（H7N1）（FPV）毒株作為免疫原，滅活后加入弗氏*佐劑和不*佐劑制成疫苗多次免疫山羊，獲得抗H7亞型禽流感的高免羊血清。 用羊血清作為捕獲抗體，H7亞型特異性單克隆抗體為檢測(cè)抗體，建立了檢測(cè)H7亞型高致病性禽流感病毒的雙抗體夾心ELISA方法。通過(guò)對(duì)各步反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化，獲得的*工作條件為：羊血清1：1000倍稀釋?zhuān)瑔慰?：40000稀釋?zhuān)笜?biāo)抗體為1：5000倍稀釋?zhuān)豢狗磻?yīng)時(shí)間1.5h，酶標(biāo)抗體作用時(shí)間1.5h。 用建立的抗原捕捉ELISA方法對(duì)已知的NDV、EDS76、IBV、IBDV、ILTV、MDV和APV等禽類(lèi)病毒以及其他15個(gè)HA亞型禽流感標(biāo)準(zhǔn)病毒株進(jìn)行交叉反應(yīng)性試驗(yàn)，結(jié)果表明：建立的H7亞型高致病性禽流感抗原捕捉ELISA方法和其他禽類(lèi)病毒以及其他亞型禽流感病毒均沒(méi)有明顯的交叉反應(yīng)性，說(shuō)明該方法對(duì)H7亞型高致病性禽流感病毒具有很好的特異性。 與血凝試驗(yàn)（HA）和雞胚接種試驗(yàn)相比，本實(shí)驗(yàn)建立的抗原捕獲ELISA方法較HA敏感2倍以上，但不如雞胚接種試驗(yàn)敏感。 利用優(yōu)化的ELISA反應(yīng)條件對(duì)人工感染的研究樣本進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)對(duì)脾臟、腎臟、心臟、肺臟等多份陰陽(yáng)性樣本的檢測(cè)zui終確定以心臟作為研究檢測(cè)的靶器官，并將0.099（OD_（490nm））作為臟器的陰陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。 將試驗(yàn)用的各種試劑及包被的反應(yīng)板組裝成試劑盒，同時(shí)保存于室溫、4℃和-20℃，定期進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明：試劑盒在室溫保存時(shí)極不穩(wěn)定，保存期限很短，4℃和-20℃條件下都可以保存3個(gè)月以上。