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鎳瓊脂糖凝膠 Ni(NTA)

鎳瓊脂糖凝膠 Ni(NTA)
英文名稱:Ni Berpharose FF-NTA
貨號:B2776
規(guī)格:1套
本產品僅供科研實驗用,不做其它用途!

  • 產品型號:
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2024-10-28
  • 訪  問  量:700
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詳細介紹

鎳瓊脂糖凝膠 Ni(NTA)


英文名稱:Ni Berpharose FF-NTA


貨號:B2776


1.      產品介紹


鎳-瓊脂糖凝膠FF(NTA)以瓊脂糖微球為基質,活化偶聯次氮基三乙酸(NTA),之后螯合Ni2+。鎳-瓊脂糖凝膠FF(NTA)主要用于分離能被金屬離子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白及帶 His標簽的重組蛋白。 


鎳 NTA瓊脂糖凝膠 FF具特異性好,螯合鎳更穩(wěn)定,不易脫落,能耐受一定強度的還原劑,物理和化學穩(wěn)定性好。


 

2.規(guī)格


1ml(預裝柱)、5ml(預裝柱)、10ml(預裝柱)、20ml、100ml、500ml


 


3.產品性能


性能


指標


基質


6%瓊脂糖微球


配基


Ni2+


載量


≥40mg His標簽蛋白/ml


粒徑


45-165μm


建議流速


50-300 cm/h


耐壓


0.3MPa


工作溫度


4-40℃


pH穩(wěn)定范圍


3-10


儲存緩沖液


20%乙醇


儲存溫度


4-8℃


4.純化流程


①平衡


鎳-瓊脂糖凝膠FF柱用2-5個柱體積的初始緩沖溶液進行平衡。


建議流速為100 cm/h。


②上樣


(1)樣品一般溶解于pH6-8的初始緩沖液中。提高上樣緩沖液的pH值可以增大載量。


(2)常用緩沖液有10-100 mM磷酸鈉緩沖液、20-200 mM Tris-HCl緩沖液等。


(3)緩沖液中一般要加入0.15-0.5 M的NaCl以消除離子交換作用。


(4)初次使用鎳-瓊脂糖凝膠FF時,推薦使用50 mM PBS(50 mM NaH2PO4、0.3 M NaCl、pH 8.0)作為初始緩沖液。


③洗脫


(1)增加咪唑濃度進行洗脫是鎳-瓊脂糖凝膠FF最-常-用的洗脫方法。


(2)咪唑為堿性,相應緩沖液配制后需要用HCl調節(jié)pH值。


(3)初次使用鎳-瓊脂糖凝膠FF時,如不確定洗脫需要的咪唑濃度,推薦在初始緩沖液中分別加入10 mM、20 mM、50 mM、100 mM、200 mM、500 mM咪唑,濃度從低


到高分別洗脫和收集重組蛋白,之后通過SDS-PAGE電泳等方法鑒定洗脫結果。


(4)有條件的可以進行咪唑梯度線性洗脫以確定較佳的洗脫條件。


洗脫方法:


(1)降低pH洗脫:大多數蛋白在pH4-6會被洗脫下來(也可以在pH 3~4),緩沖液可以是醋酸鈉、檸檬酸和磷酸鹽緩沖體系。


(2)競爭性洗脫:線性增加或一步增加同金屬離子有親和力的競爭物質的濃度(如0-0.5M咪唑、0-50 mM組-氨酸、0-2M NH4Cl)。梯度洗脫最好在起始緩沖液的恒定pH值下進行。


 5.在位清洗


(1)去除因離子交換作用吸附的蛋白:使用1.5M NaCl溶液接觸時間為10-15分鐘清洗,然后,再使用去離子水清洗10個柱體積。


(2)去除強疏水性蛋白和脂質等:通過使用30%異丙醇清洗5-10個柱體積,接觸時間為15-20分鐘可以去除此類污染物。


然后,再使用10倍柱體積的去離子水清洗。也可以選擇使用含有去污劑的酸性或堿性溶液, 清洗填料2倍柱體積。例如,含有0.1–0.5%  非離子去污劑的0.1 M  醋酸溶液,接觸時間 為1–2  小時。去污劑處理后,需要使用70%的乙醇清洗5個柱體積,以徹-底去除去污劑。 最后使用10倍柱體積的去離子水清洗。


5.注意事項:


1)使用時保證柱子和緩沖液的溫度一致,避免柱床內產生氣泡,影響純化效果。


2)本產品保存條件為20%乙醇,4-8℃。


3) 2-25℃,常壓,避光運輸。


4)僅供科研實驗使用。


鎳瓊脂糖凝膠 Ni(NTA)

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