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基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2/9活性檢測(cè)試劑盒,明膠酶譜法注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2015-06-23      瀏覽次數(shù):2217

     基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2/9活性檢測(cè)試劑盒,明膠酶譜法注意事項(xiàng)

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      我們?cè)谧雒髂z酶譜法實(shí)驗(yàn)的時(shí)候,總是會(huì)遇到很多這樣那樣的問(wèn)題,那么這個(gè)基本原理是什么,我們操作過(guò)程中應(yīng)該注意哪些問(wèn)題呢,上海信帆生物為您答疑。

      酶譜法的基本過(guò)程是先將樣品進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE,含0.1%明膠)電泳分離,然后在有二價(jià)金屬離子存在的緩沖 系統(tǒng)中使樣品中的MMP-2和MMP-9恢復(fù)活性,在各自的遷移位置水解凝膠里的明膠,zui后用考馬斯亮藍(lán)將凝膠染色,再脫色,在 藍(lán)色背景下可出現(xiàn)白色條帶,條帶的強(qiáng)弱與MMP-2和MMP-9活性成正比。
 
        復(fù)性原理:在電泳過(guò)程中,SDS與樣品中的MMPs結(jié)合(當(dāng)然是可逆性結(jié)合),破壞其氫鍵、疏水鍵而使MMPs不能發(fā)揮其分解明膠的作用,而只有當(dāng)將膠置Trition中洗脫(是放在搖床上搖,30min/次,做2次或15min/次,4次。靜置于Trition中是不妥的。)時(shí),由于SDS被Trition結(jié)合而去除,從而使MMPs恢復(fù)了活性。

操作注意事項(xiàng):

1.試劑盒的操作方法同WB是一樣的

2.試劑盒的陽(yáng)性對(duì)照,是選用全血做對(duì)照,具體如下操作如下:

陽(yáng)性對(duì)照(可選步驟):可取人、小鼠、大鼠或兔100μl全血與100μl 2 × SDS-PAGE non-reducing buffer等體積混合,取5-15μl上樣。

3.在操作孵育的時(shí)候,建議孵育5小時(shí)

4.本試劑盒可以檢測(cè)MMP2/9活性,同時(shí)可以測(cè)定PROMMP2/9,可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要,選取觀察。

5.本試劑盒上樣蛋白建議20ug。



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